在B细胞前体急性淋巴细胞白血病(BCPALL)的MRD上,多色流式已经有着十分明显的优势,快速、经济、成熟且广泛可用。最近在数据处理和仪器方面的改进已经显示,八色流式可以实现与分子技术相同水平的灵敏度和特异性(KarawajewL,DworzakM,RateiR,RheinP,etal.Minimalresidualdiseaseanalysisbyeight-colorflowcytometryinrelapsedchildhoodacutelymphoblasticleukemia.Haematologica;:-)。
多色流式也适用于多中心标准化。然而,该技术仍然面临的主要挑战是在少数病例中,目前使用的标记组可能不足以在富含正常B细胞前体的背景中确切地检测出MRD,增加了假阴性的风险。这主要是由于一部分BCPALL病例在使用当前标准标记的MRD分析中在初发时白血病原始细胞和/或治疗时药物诱导免疫表型变化后,可能只存在有限数目(一个或无)的LAIP。
年,医院的翁香琴曾发表过一篇文章,采用如下八色方案,在成人B-ALL中,96%病例的诊断敏感性可达万分之一,81.6%病例诊断敏感性可达10万分之一。(WengXQ,ShenY,ShengY,etal.Prognosticsignificanceofmonitoringleukemia-associatedimmunophenotypesbyeight-colorflowcytometryinadultB-acutelymphoblasticleukemia.BloodCancerJ;3:e.)
如此看来,大约有接近五分之一病例无法达到10万分之一的敏感度,因此,印度的PrashantRTembhare等人开始寻找新的BCPALL标记,以便覆盖更多的BCPALL患者。
〖结果〗作者采用的方案如下表:
标准抗体组合
实验探索的抗体组合(包含克隆号)
图1、显示了正常CD19+B细胞的点图。该图显示了早期(CD10+CD19+CD34+,Hg-1)造血细胞(橙色)和晚期(CD10+CD19+CD34-,Hg-2)造血细胞(橄榄色)上的六种新标记的表达模式。灰点表示成熟B细胞。在六个新的标记物中,CD44、CD73和CD86显示阴性表达。CD24在造血细胞的两个阶段中显示强(MFI比阴性细胞≥5倍)和均一(形成紧密的群体)表达。然而,CD72在早期造血细胞上呈弱表达,在晚期造血细胞上表达略强,相比之下,CD在早期造血细胞上呈中度表达,而在晚期造血细胞上相对弱表达。
图2-a、BCPALL患者初诊时的表型,蓝色点为正常造血细胞,红色点为白血病细胞,6个新标记中,CD73和CD86的上调可以比较明显地区分出白血病细胞。
在图2-b中,也证实了CD73和CD86在MRD检测中的好处。
最后,作者认为,在BCPALL患者诊断时,CD73、CD86、CD72、CD44、CD和CD24的LAIP的频率分别为76.7%、56.7%、55.6%、50%、28.9和20%。所有新标记物的表达在早期(CD10+CD19+CD34+)造血细胞、晚期(CD10+CD19+CD34-)造血细胞和BCPALL原始细胞之间都是存在显著差异的(p0.01),不过早期造血细胞和BCPALL的CD除外(p=0.1)。在MRD阳性样品中,CD73异常的LAIP频率最高(83%),CD86异常表达的LAIP稳定性最好(%稳定)。MRD方案中包含了CD73和CD86后,可使多色流式对BCPALLMRD检测的适用患者增加到98.9%。
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