文章解读多色流式细胞术诊断混合表型急

混合表型急性白血病（MixedPhenotypeAcuteLeukemia,MPAL）是一种预后较差表型不明确的急性白血病，依据不同的分型指南，使用传统的MICM分型方案，我们可以对混合表型急性白血病作出诊断，进行相应的治疗，通过解读年4月发表在CytometryB上的综述文章MultiparameterFlowCytometryApplicationsintheDiagnosisofMixedPhenotypeAcuteLeukemia，我们总结多色流式细胞术在混合表型急性白血病诊断中的应用和方案设计。

混合表型急性白血病是一大类急性白血病的统称，使用形态学和免疫分型技术，我们可以了解到MPAL有两种表现：

?双克隆（bilineal）：存在两个不同克隆的原始细胞，在SSC/CD45散点图上容易被认为是一群细胞，或一群原始细胞数量较另一群原始细胞数量更多，数量较少的一群原始细胞较难被发现；

?双表型（biphenotypic）：一群原始细胞同时表达不同谱系的特异性标记，无法通过CD45或SSC信号进行区分，是真正的混合表型。

诊断混合表型急性白血病的基础，是分清不同系别白血病的诊断标准，目前可以借鉴或在诊断白血病系别中极为重要的有如下三个标准：

?年欧洲白血病免疫学分型协作组（EuropeanGroupforImmunophenotypingofLeukemias,EGIL）制定的诊断积分系统

?WHO诊断分型标准

?WHO诊断分型标准

三个标准的对比请参考表1。

表1.EGIL、WHO和WHO分型标准建议MPAL诊断指标对比

MultiparameterFlowCytometryApplicationsintheDiagnosisofMixedPhenotypeAcuteLeukemia.CytometryPartB.

EGIL诊断积分系统根据不同指标在不同谱系细胞中的表达比例和特异性，给予不同分值，如果原始细胞同时表达两个谱系的指标，并且各谱系指标得分超过2分，即可诊断为MPAL，EGIL使用的抗体组合请参考表2。

和版WHO分型方案类似，使用更少的指标确认原始细胞的系列，确认标准请参考表3。

表2.EGIL诊断混合表型急性白血病积分系统

Mixed-PhenotypeAcuteLeukemia:DiagnosticCriteriaandPitfalls.ArchivesofPathologyLaboratoryMedicine.

表3.WHO分类系列确认标准

整理自：四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（年版）

作者统计了近期发表的文献中混合表型急性白血病的比例和使用的分型方法，可以看出B淋巴细胞伴髓系混合表型比例最高，超过一半，T淋巴细胞伴髓系混合表型比例在三分之一左右，T/B/髓系以及T/B混合表型急性白血病比例相对较低，均在10%以下，并且其中有两篇文章分别由江苏血研所和天津血研所发表，可见中国人群和欧美人群在混合表型急性白血病的亚型分布无明显差异，见表4。

表4.文献中MPAL亚型频率统计

MultiparameterFlowCytometryApplicationsintheDiagnosisofMixedPhenotypeAcuteLeukemia.CytometryPartB.

接下来，我们通过几例混合表型急性白血病的流式结果，分析在MPAL诊断中多色流式细胞术的应用方案。

图1是一例典型的双克隆混合表型急性混合表型白血病的流式结果，在CD45/SSC散点图中，红色细胞群为成熟粒细胞，粉红色细胞群为成熟淋巴细胞，绿色细胞群为成熟单核细胞，幼稚细胞区域明显有两群细胞，分别为蓝色和紫色。分析蓝色和紫色细胞群体的特异抗原表达，我们可以看出蓝色细胞群体的抗原表达模式为CD+CD34+CD33+，根据EGIL积分体系，蓝色细胞群体为髓系细胞；而紫色细胞群体CD19+CD34+CD-，可以判断为B淋巴细胞来源。

图1.一例双克隆混合表型急性白血病流式图

MultiparameterFlowCytometryApplicationsintheDiagnosisofMixedPhenotypeAcuteLeukemia.CytometryPartB.

图2也是一例双克隆混合表型急性混合表型白血病的流式结果，但从CD45/SSC图中无法区分两群幼稚细胞，具有一定的迷惑性。通过分析CD19/SSC，CD19/CD34，CD34/CD33散点图，发现幼稚细胞表达CD19，CD33和CD34，并且CD19和CD33不共表达，通过反向圈门可以看出蓝色的CD19阳性B淋巴细胞来源的幼稚细胞形态与淋巴细胞相近，而黄色的髓系来源幼稚细胞SSC与淋巴细胞有一定重叠，但高于淋巴细胞。此病例也是B淋巴细胞和髓系细胞来源的两群幼稚细胞。

图2.一例双克隆混合表型急性白血病流式图

MultiparameterFlowCytometryApplicationsintheDiagnosisofMixedPhenotypeAcuteLeukemia.CytometryPartB.

图3CD45/SSC散点图中，红色细胞群体为成熟粒细胞，粉色细胞群体为成熟淋巴细胞，青色细胞群体为幼稚细胞，通过分析幼稚细胞的抗原表达，其表型为CD19阳性，CD33部分阳性，MPO部分弱阳性，并且CD19和MPO共表达，表明此病例为B淋巴细胞/髓系混合表型急性白血病。

图3.一例双表型混合表型急性白血病流式图

MultiparameterFlowCytometryApplicationsintheDiagnosisofMixedPhenotypeAcuteLeukemia.CytometryPartB.

图4CD45/SSC散点图中，绿色细胞群体为成熟淋巴细胞，蓝色细胞群体为幼稚细胞，通过分析幼稚细胞的抗原表达模式，幼稚细胞表达髓系特异性标记MPO、CD13、CD33，MPO与T细胞特异性标记胞浆CD3共表达，但不表达B细胞特异性标记CD19，故此病例为T淋巴细胞/髓系混合表型急性白血病。

图4.一例双表型混合表型急性白血病流式图

Mixed-phenotypeacuteleukemia:clinicalandlaboratoryfeaturesandout