流式细胞术免疫表型分析

流式细胞术免疫表型分析

一、标本采集　　

用一次性注射器吸取肝素钠抗凝剂将针筒充分润湿后将肝素钠全部排除，抽取骨髓液2毫升，将注射器帽盖密封盖上注射器后送检。或者无菌状态下将骨髓注入肝素钠抗凝管中送检。

二、正常参考标准　　

（一）AML

1、AML-MO：有低的SSC和FSC。在CD45-SSC图上出现在淋巴细胞位置上，至少表达一个特异性标志如CD13或CD，但MPO比CD13与CD33更灵敏。一般淋系标志阴性，但也可表达CD7或CD4。

2、AML-M1：流式上M1与M0相似不易区分，M1一般CD13＋、CD33＋、HLA-DR－，但CD34表达少于M0，可能表达部分CD15。

3、AML-M2：M0与M1的主要区别是成熟度增加，CD15较M1较显著，CD34弱于M1，CD13有时表达强于CD33，多数病例HLA-DR（-）。

4、AML-M3：高颗粒性，具较高的SSC，但CD45较成熟细胞少，多数情况HLA-DR（-）或表达减少，CD34少于M2、一般CD13弱（＋），可有CD2表达。

5、AML-M4与M5：两型表型相似，但M4较M5表达更多的CD34（＋），较之M0、M1，M4与M5有更大的FSC和SSC，CD45-SSC图上，成熟细胞出现在单核区，重要的表型为CD13、CD33、HLA－DR、CD14和CD15，CD33可表达强于CD13，CD33（＋）、CD13（－）、CD34（－）很可能为M5，但只出现在少数病人中，部分M5可见CD56（＋）。

6、AML-M6：M6较少见且特征不明显，一般HLA－DR、CD34、CD13、CD33阳性，CD45－SSC图显示主要为红系成份。

7、AML-M7：巨核细胞白血病，在AML中少于1％。一般CD61（GpⅢa）和/或CD41（GpⅡb/Ⅲa）阳性。

（二）ALL：

我们将ALL分为B祖细胞型，CD10＋或CD10－，前B细胞型，B细胞型，T细胞型。

1、B祖细胞型ALL：在幼儿约占ALL的65％～70％，青少年为55％～60％，成人为50％。在儿童，约90％病例CD10＋，在幼儿只有少于50％病例CD10＋，一般FSC、SSC很少，是FAB标准的L1或L2，一般TdT(+)、HLA-DR(+)，CD19(+)，此型又分为2个亚型，CD10＋和CD10－，前者预后好，多数病例CD24＋，CD34＋，CD20表达随成熟度增加而增加，B祖细胞被定义为sIg-。

2、前B细胞型ALL：　　此亚型约占儿童ALL的25％，细胞一般为CD19＋，CD24，HLA-DR＋，胞浆CD22＋，CD10＋，TdT随CD20变化，CD34多为阴性，前B亚型被认为比B祖型预后更差，这与t(1；19)出现有关，它的表型为CD19＋、CD10＋、CD9＋，不同程度CD20表达，CD34－，确认此表型有助于诊断基因上不确定的病例。

3、B细胞型ALL：成熟B细胞型ALL约占ALL2％～5％，B细胞型ALL较之B祖细胞型ALL有更大的FSC和SSC，在CD45－SSC图上出现在淋巴和单核细胞区域，即FAB标准的L3，表型为CD19、CD20、CD22、CD24且sIg（多数为IgM）多数病例CD10＋。但成熟抗原及sIg使之区别于更早的B系ALL，极少数成熟B细胞ALL无FAB－L3形态。

4、T－ALL：多数病例有大的FSC、SSC，在CD45-SSC图上可能出现在淋系未成熟细胞和髓系未成熟细胞或单核细胞区，多数表现为胸腺亚型，最常见亚型为皮质晚期表达，CD1、CD2、CD5、CD7、CD4/CD8双阳与极少膜表面CD3、TdT多为阳性。另一常见亚型为皮质早期表达CD2、CD5、CD7、TdT强表达。髓质期亚型表达CD2、CD5、CD7、与CD3＋CD4＋/CD3+CD8+,很少见TdT表达。前T细胞亚型，表达CD7胞浆CD3＋且无其它T细胞抗原，T细胞肿瘤的特征是丧失T细胞抗原而表现出其它异常抗原组合。

（三）杂合型白血病：

随着流式技术的广泛应用，我们发现许多病例并不能严格划分为淋系或髓系，真正的双表型病人多为t(9；22)或（11q23），现在杂合型的误诊率很高。最常导致误诊的原因是在分析中未能排除非白细胞，过度强调弱的非特异性结合，忽略了某些抗体缺乏系特异性，最重要的系特异性抗原在B系、T系、髓系分别为CD22、CD3和MPO。

三、临床意义　　

流式细胞术（FCM）白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜、细胞浆和细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。

FCM分析白血病免疫表型时，测量细胞数量一般在-个细胞之间，而且快速、特异、准确、重复性好，能区分细胞的系列、划分其分化、发育阶段等，对白血病细胞的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机制研究等有重要价值。

骨髓血细胞形态分型是白血病分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一急性白血病都是必不可少的，对下列三种情况意义更大：

*用形态学、细胞化学染色不能肯定来源的白血病；

*形态学似急性淋巴细胞白血病ALL或急性未分化白血病AUL；

*混合性白血病。

目前，免疫分型对急性髓系细胞白血病M0、M1、M2、M3、M6、M7分型也有重要意义，但对急性粒单核细胞白血病M4和急性单核细胞接生M5的分型尚有一定难度。对微量残留白血病检测亦有重要价值。

四、注意事项　　

1、标本采集和运送过程中应严格注意避免溶血、凝血。

2、标本保存：存放于4～10℃冰盒中，可保留24小时，建议尽快送检。